0

تکنیک Real-time PCR یا PCR کمی

تکنیک Real-time PCR یا PCR کمی

تکنیک Real-time PCR یا PCR کمی

تکنیک Real-time PCR یا PCR کمی، نوعی از آزمایش PCR است که در آن میزان محصولات تولیدشده در هر چرخه واکنش با استفاده از یک مولکول گزارشگر فلورسنت اندازه گیری میشود. این تکنیک امکان تعیین مقدار دقیق DNA یا RNA هدف را در نمونه های مختلف فراهم میکند. تکنیک Real-time PCR کاربردهای زیادی در تشخیص بالینی، تحقیقات ژنتیک، بیوتکنولوژی و زیست شناسی مولکولی دارد.

تکنیک Real-time PCR یا PCR کمی

دستگاه های ریل تایم PCR

دستگاه های ریل تایم PCR، دستگاه هایی هستند که برای اندازه گیری مقدار DNA یا RNA هدف در نمونه های مختلف استفاده میشوند. این دستگاه ها با استفاده از یک مولکول گزارشگر فلورسنت، میزان تکثیر DNA یا RNA را در هر چرخه واکنش اندازه گیری میکنند و نتایج را به صورت گرافیکی نشان میدهند. این دستگاه ها دقت، حساسیت، سرعت و خودکار بودن بالاتری نسبت به PCR ساده دارند و کاربردهای زیادی در تشخیص بالینی، تحقیقات ژنتیک، بیوتکنولوژی و زیست شناسی مولکولی دارند.

دستگاه های ریل تایم PCR

 

   دستگاه های ریل تایم PCR با سطح تحلیل بالا:

 این دستگاه ها، ظرفیت بالا (96 یا 384 چاهک) دارند و قادر به انجام چندین واکنش PCR به صورت همزمان هستند. این دستگاه ها مولتی پلکسینگ و نرم افزار تحلیل داده را دارند. این دستگاه ها پیشرفته، کارآمد و مناسب برای تحقیقات ژنومیک، پروتئومیک و ترانسکریپتومیک هستند. از جمله این دستگاه هاRotorgene Q ، Step One Plus و   LightCycler 96  است که در زیر، دستگاه روتورجین و استپ وان پلاس را برای شما معرفی کرده ایم.

معرفی یکی از بهترین و پرطرفدارترین دستگاه های ریل تایم PCR در مجموعه ماناتک:

دستگاه  HRM Rotorgene Q از کمپانی Qiagen آلمان:

    • 5کاناله نقره ای رنگ همراه با HRM
    • روتور دارای ظرفیت  36،72، 100 چاهک با ویژگی تغییر روتور،
    • دارای ظرفیت افزایش پذیر بلوک ها به بالای 100 نمونه،
    • امکان استفاده از میکروتیوب های 0.2 میلی لیتری،
    • امکان استفاده از استریپ 4 عددی با حجم  0.2 میلی لیتر
    • با رنج دمایی 99-35
    • حجم سمپل ها  50-10 µl ،
    • دارای رنگ های Green, Yellow, Red, Orange, Crimson, HRM 
    • فاقد نمایشگر لمسی touchscreen  و فاقد زون
این مقاله از دست ندید!  با بهترین مکمل های ضد سرطان آشنا شوید

تنها دستگاهی است که دارای طراحی سیستم چرخشی rotary است و دما را از طریق جریان هوا تنظیم می کند و  همین امر آن را در کنترل، دقیق تر و یکنواخت تر می کند.

کاربردهای بیشتر نسبت به دیگر دستگاه های ریل تایم، تشخیص یکنواخت که نیاز به رنگ  ROX را از بین می برد، می باشد.

رمپینگ سریع و طمینان کامل از نتایج به دست آمده این دستگاه را به یک دستگاه فوق العاده تبدیل کرده است.

کاربردهای دستگاه شامل:

    • آنالیز بیان ژن
    • شناسایی پاتوژن ها
    • آنالیز متیلاسیون DNA
    • ژنوتایپینگ
    • اسکن و بررسی موتاسیون ها
    • امکان تشخیص SNP کلاس 4
    • آنالیز ذوب با دمای بالا

 دستگاه مشابه روتور جین، دستگاه کوربت قرمز رنگ می باشد که کارکرد مشابه با این دستگاه داشته و فقط تفاوت رنگی و کمپانی سازنده دارد.

دستگاه ریل تایم PCR مدل استپ وان /استپ وان پلاس :

از کمپانی آمریکایی ABI بوده که دارای سرعت و دقت بالا  با 3 و 4 کانال نوری  می باشد (مدل استپ وان پلاس دارای 4 کانال و ظرفیت 96 چاهک می باشد و دستگاه استپ وان دارای 3 کانال و ظرفیت 48 چاهک است). این دستگاه دارای 3 زون برای مدل استپ وان و 6 زون برای مدل پلاس است که توانایی انجام سریع ریکشن ها را در کمتر از 40 دقیقه دارا می باشد.  حجم سمپل ها 30-10 µl است.

از مشخصات مشترک این دستگاه ها صفحه نمایش بزرگ لمسی و دارا بودن لامپ های LED با طول عمر طولانی برای طیف رنگیROX, VIC/JOE, FAM/SYBR Green I می باشد. این دستگاه دارای توانایی انجام آنالیز high-resolution melt  می باشد و تکنولوژی VeriFlex™ Block  در مدل Step One Plus وجود دارد.

برای کسب اطلاعات بیشتر و دریافت مشاوره اختصاصی برای خرید انواع دستگاه های PCR  و ریل تایم PCR با کارشناسان زبده ما در ماناتک تماس حاصل فرمایید.

انواع رنگ ها در دستگاه های ریل تایم:

تعدادی از مهم ترین رنگ ها در دستگاه های ریل تایم در زیر توضیح داده شده اند که همگی برای تشخیص ژنهای هدف، رفرنس و کنترل داخلی مناسب هستند:

این مقاله از دست ندید!  انتخاب بهترین نوشیدنی برای افراد دیابتی

•  رنگ: FAM یک رنگ فلورسنت است که به طور معمول برای لیبل دار کردن پرایمرهای فوروارد در ریل تایم استفاده میشود. این رنگ با جذب طول موج ۴۹۵ نانومتر، نور ۵۲۰ نانومتری را ساطع میکند. این رنگ دارای حساسیت بالا و پایداری خوبی است.

•  رنگ: ROX یک رنگ فلورسنت است که به طور معمول برای لیبل دار کردن پروب ها در ریل تایم استفاده میشود. این رنگ با جذب طول موج ۵۸۰ نانومتر، نور ۶۰۵ نانومتری را ساطع میکند. این رنگ دارای پایداری بالا و خاموش شدن سریع در شرایط دمای بالا است.

•  رنگ: CY5 یک رنگ فلورسنت است که به طور معمول برای لیبل دار کردن پروبها در ریل تایم استفاده میشود. این رنگ با جذب طول موج ۶۴۹ نانومتر، نور ۶۶۶ نانومتری را ساطع میکند. این رنگ دارای حساسیت پایین و خاموش شدن کند در شرایط دمای بالا است.

  رنگ: VIC یک رنگ فلورسنت است که به طور معمول برای لیبل دار کردن پرایمرهای ریورس در ریل تایم استفاده میشود. این رنگ با جذب طول موج ۴۹۷ نانومتر، نور ۵۳۰ نانومتری را ساطع میکند. این رنگ دارای حساسیت بالا و پایداری خوبی است.

•  رنگ: HEX یک رنگ فلورسنت است که به طور معمول برای لیبل دار کردن پروب ها در ریل تایم استفاده میشود. این رنگ با جذب طول موج ۵۳۰ نانومتر، نور ۵۵۶ نانومتری را ساطع میکند. این رنگ دارای حساسیت بالا و خاموش شدن سریع در شرایط دمای بالا است.

•  رنگ: ORANGE یک رنگ فلورسنت است که به طور معمول برای لیبل دار کردن پروب ها در ریل تایم استفاده میشود. این رنگ با جذب طول موج ۵۴۰ نانومتر، نور ۵۶۰ نانومتری را ساطع میکند. این رنگ دارای حساسیت بالا و خاموش شدن سریع در شرایط دمای بالا است.

•  رنگ: TEXAS RED  یک رنگ فلورسنت است که به طور معمول برای لیبل دار کردن پروب ها در ریل تایم استفاده میشود. این رنگ با جذب طول موج ۵۹۶ نانومتر، نور ۶۱۵ نانومتری را ساطع میکند. این رنگ دارای حساسیت پایین و خاموش شدن کند در شرایط دمای بالا است.

این مقاله از دست ندید!  آیا مصرف بستنی در هنگام سرماخوردگی به ضرر است؟

•  رنگ: QUASAR 670 یک رنگ فلورسنت است که به طور معمول برای لیبل دار کردن پروب ها در ریل تایم استفاده میشود. این رنگ با جذب طول موج ۶۴۹ نانومتر، نور ۶۷۰ نانومتری را ساطع میکند. این رنگ دارای حساسیت پایین و خاموش شدن کند در شرایط دمای بالا است.

•  رنگ SYBR  : یک رنگ فلورسنت است که به طور عمومی برای تشخیص DNA در ریل تایم استفاده میشود. این رنگ با جذب طول موج ۴۹۸ نانومتر، نور ۵۱۸ نانومتری را ساطع میکند. این رنگ دارای حساسیت بالا و خاموش شدن کند در شرایط دمای بالا است و برای تشخیص DNA هدف، DNA قالب و DNA آلودگی مناسب است که به تفضیل در مقالات:  تفاوت سایبرگرین و اواگرین و همچنین تفاوت سایبرگرین و پروب شرح داده شده است و میتانید به این دو مقاله مراجعه فرمایید.

انواع رنگ ها در دستگاه های ریل تایم:

معرفی برخی از دستگاه های ریل تایم PCR و رنگ های مورد استفاده در آن ها:

•  دستگاه: ABI 7500 این دستگاه قابلیت شناسایی پنج رنگ فلورسنت را دارد که عبارتند از: FAM, VIC, NED, ROX و TAMRA

•  دستگاه: Bio-Rad CFX96 این دستگاه قابلیت شناسایی شش رنگ فلورسنت را دارد که عبارتند از: FAM, HEX, ROX, Texas Red, Cy5 و Cy3

•  دستگاه: Roche LightCycler 480 این دستگاه قابلیت شناسایی چهار رنگ فلورسنت را دارد که عبارتند از: FAM, HEX, ROX و Cy5

•  دستگاه: Thermo Scientific PikoReal 96 این دستگاه قابلیت شناسایی چهار رنگ فلورسنت را دارد که عبارتند از: FAM, HEX, ROX و Cy5.

کلام آخر

شما در این مقاله با دستگاه ریل تایم PCR  آشنا شده اید ما این دستگاه را برای شما به خوبی توضیح دادیم که اگر قصد خرید دستگاه ریل تایم PCR  را دارید بتوانید نکات مورد نیاز را رعایت کنید.

نظرات کاربران

  •  چنانچه دیدگاهی توهین آمیز باشد و متوجه نویسندگان و سایر کاربران باشد تایید نخواهد شد.
  •  چنانچه دیدگاه شما جنبه ی تبلیغاتی داشته باشد تایید نخواهد شد.
  •  چنانچه از لینک سایر وبسایت ها و یا وبسایت خود در دیدگاه استفاده کرده باشید تایید نخواهد شد.
  •  چنانچه در دیدگاه خود از شماره تماس، ایمیل و آیدی تلگرام استفاده کرده باشید تایید نخواهد شد.
  • چنانچه دیدگاهی بی ارتباط با موضوع آموزش مطرح شود تایید نخواهد شد.

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *